為了探究“社交"對行為的影響，研究團隊設(shè)計了一套物理隔離方案：

• 群養(yǎng)組：將5個胚胎固定在一個24孔板的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)孔底部中心。胚胎在環(huán)內(nèi)可以自由移動、相互接觸，模擬自然“抱團"狀態(tài)；

• 隔離組：使用定制的板，板上帶有5個獨立的微小凹槽，每個凹槽剛好容納一個胚胎。凹槽間的隔斷確保胚胎無法發(fā)生物理接觸，運動軌跡也獨立，實現(xiàn)了物理隔離。

Rotenone是一種天然植物毒素，常用于在斑馬魚中模擬帕金森病癥狀，其神經(jīng)毒性明確。研究選用Rotenone，實驗設(shè)置了四個濃度梯度：1.0， 10.1， 20.3 nM，以及0.1% DMSO溶劑對照。濃度范圍基于前期魚胚胎急性毒性（FET）測試結(jié)果，涵蓋了從無效應(yīng)到明顯效應(yīng)的區(qū)間。

實驗使用野生型斑馬魚胚胎。在胚胎發(fā)育的21至47小時這一關(guān)鍵窗口期，研究團隊每小時進(jìn)行一次長達(dá)8分鐘的高清視頻錄制。這一時段覆蓋了自發(fā)卷尾的起始、高峰及逐漸向游泳行為過渡的全過程。使用斑馬魚微視行為分析系統(tǒng)（DanioScope）分析視頻。軟件通過識別胚胎尾部像素的變化，自動量化兩個核心行為參數(shù)：① 平均卷尾爆發(fā)次數(shù)/分鐘（反映運動頻率），② 平均卷尾持續(xù)時間（以秒計，反映單次運動的強度）。